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iFish專業軟件,熒光原位雜交(fluorescenceinsituhybridization)簡稱FISH,是指用已知的熒光素標記的單鏈核酸為探針,按照堿基互補配對的原則,與待檢測材料中未知的單鏈核酸進行特異性結合,形成可被檢測的雜交雙鏈核酸。隨后在熒光顯微鏡下進行定性、定量或相對定位分析。與傳統的放射性標記原位雜交相比,熒光原位雜交具有快速、檢測信號強、雜交特性高和可以多重染色等特點,因此在分子細胞遺傳學領域受到普遍關注。
iFish專業軟件的原理如下:FISH使用的探針DNA帶有熒光染料;探針DNA的序列的設計和目標DNA序列一致;在特殊設定下,目標DNA和探針DNA的雙鏈會被分開,隨后因互補配對粘合在一起(因序列一致),粘合的部分(也就是目標DNA的位置),在特殊顯微鏡觀察下可顯示熒光,這樣就知道目標DNA的表達是在什么位置了。
iFish專業軟件可用于轉基因的細胞學鑒定:在外源基因表達中一個重要的影響因素就是位置效應,即外源基因在受體細胞基因組中的位置不但影響轉入基因的表達也影響生物內在基因的結構和表達。如果原位雜交檢測顯示特異的雜交信號,則表明外源基因已經整合到該生物的染色體上。除此之外,重組細胞系的分析和鑒定也非常重要,與基因拷貝數相反,似乎更考慮了外源基因的染色體整合。由于整合事件的隨機性質,幾個位點可能能夠支持轉基因的轉錄,或者表達水平受基因環境在基因座處的作用(位置效應)影響很大。熒光原位雜交(FISH)是一項功能強大的技術,可用于可視化外源基因整合位點并提供對外源基因的情況有更好理解。憑借多年的經驗和深入的知識,我們可以使用熒光原位雜交(FISH)來確認轉基因的整合并確定其染色體帶位置。
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